HEPES（4-羟乙基哌嗪乙磺酸）是一种氢离子缓冲剂，pH值缓冲范围：6.8-8.2。我们在细胞培养过程中，经常少不了HEPES缓冲液。它是一种弱酸，在开放式的培养条件中，若加入HEPES，可防止培养基内pH氧化升高，从而将PH维持在7.0左右，下面我们继续看看HEPES在细胞培养中的应用。
1.HEPES在低温时可较好地保持酶的结构和功能
HEPES缓冲液是一种弱酸，常作为有机化工中的两性离子缓冲剂和医药中间体。该物质的分解能力可随温度的升高而增强，随温度的降低而减弱，但与其他缓冲剂相比，它的分解常数随温度变化不大，这使HEPES缓冲液成为在低温时可较好地保持酶的结构和功能的缓冲剂。
2.HEPES PH值范畴有益于细胞培养
通常，大多数细胞的最佳培养环境是pH7.2-pH7.4，而Hepes的缓冲范围刚好为pH6.8-pH8.2内。这对细胞培养是有益的，与其他缓冲剂相比，Hepes在维持细胞培养基的pH值方面具有更高的稳定性，这也是Hepes广泛用于细胞培养，组织培养，蛋白质纯化和提取，免疫沉淀，细胞裂解，活细胞成像和其他生物/生化研究的原因。
3.HEPES有益于肺炎支原体培养
HEPES 是常用细胞培养缓冲剂，使用终浓度一般为10～50 mmol/L，通常情况下培养液内含20 mmol/L HEPES 即可起到缓冲作用，细胞培养常用浓度为10 mmol/L。HEPES 缓冲液在此过程中发挥了缓冲作用，且浓度越大缓冲效果越明显。当培养基 pH 在 6.8 左右时，培养的肺炎支原体进入了对数生长中后期；培养基PH在 6.5～6.0之间，培养基中的肺炎支原体含量达到平台期，菌量维持在很大水平。
4.大肠杆菌培养基中建议使用HEPES
大肠杆菌培养基中比较常用的Buffer system是碳酸氢盐，它可提供营养，但却在生理PH值条件下会降低缓冲能力。而HEPES是一种很强的Buffer，加入HEPES能使细胞培养基在PH7.2-7.6条件下缓冲能力增强。Hepes的贮存液浓度一般为1M，常温保存。培养基中的终浓度为25mM，即5ml 1M的Hepes加入到200ml完全培养基中。
培养细胞的重要环节有很多，其中很重要的一步就是为细胞选择适合的生长环境，选择高品质的培养基，对于细胞培养而言，不仅可以确保您实验数据的稳定性和可重复性，更能节约宝贵的实验时间和精力。德晟生产的HEPES为白色晶体粉末，主含量≥99.50%，铁离子≤5ppm，***盐≤0.05%，重金属残留（Pb)≤10ppm。可提供试用样品粉末，自行配置成溶液进行检测使用。