生物缓冲剂HEPES、PIPES的制备方法及使用注意事项

 
 
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更新 2021-05-24 16:02
 

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详细说明

许多生物学实验都需要使用缓冲液来维持有效的pH,这很重要,因为蛋白质和酶对pH的变化敏感,因此为当前和下游实验选择正确的缓冲液至关重要。在本文中,我将简要讨论HEPESPIPES在配置及使用过程中要考虑的一些重要因素,希望能对大家有所帮助。

如何制作HEPES及使用注意事项

HEPES是两性离子Good's缓冲液,在6.88.2pH范围内有效。这使HEPES在生理pH值下成为有效的缓冲液。该缓冲液可用于多种生物的细胞培养基中。它也可用作蛋白质研究中的结合缓冲液,用于阳离子交换洗脱实验中,以及在凝胶电泳中用作运行缓冲液。

HEPES的制备步骤:

要制备11M HEPES缓冲溶液,请将238.30 g GoldBio HEPES溶解 750 mL dH 2 O中。使用10N氢氧化钠调节至所需的pH。您可以在1M HEPES PDF协议中使用一张表。用dH 2 O填充至终体积1L,并通过过滤器或高压釜灭菌。将缓冲液储存在4℃。如果您使用的是HEPES钠盐,请改用HEPES-Na方案。

注意事项:

HEPES可溶于水,价格便宜,并且通常具有生物惰性。但是,它确实参与了产生自由基的氧化还原反应,并干扰了DNA和限制性内切酶之间的反应,但是由于空间位阻,其干扰程度小于Tris。同样重要的是要注意,当使用异质连接蛋白通道时,不应使用HEPES,因为它会抑制其功能。如果要进行毒性研究,请选择HEPES钠盐而不是游离酸。

如何制作PIPES及使用注意事项

PIPES是哌嗪缓冲液家族的一员,与HEPES属于同一家族。它是两性离子Good's缓冲液,在6.17.5pH范围内有效。由于pH范围与HEPES略有不同,PIPES的浓度仅为HEPES浓度的一半。该缓冲剂不会与金属络合,因此可用于含金属离子的溶液。它也可以用于色谱分析,电子显微镜固定植物细胞,以及代替草甘膦缓冲液。

PIPES的制备步骤:

要制备11M PIPES游离酸缓冲溶液,请将302.37g  PIPES游离酸添加到600 mL dH 2 O中。使用10N氢氧化钠调节至所需的pH值。您可以在1M PIPES PDF协议中使用一个表。用dH 2 O填充至终体积1L,并使用过滤器或高压灭菌器灭菌。储存在4˚C。如果您使用的是PIPES钠盐,请改用1M PIPES-Na PDF协议。

注意事项:

直到溶液的pH值升高到6.5以上时,PIPES的游离酸才容易溶解,但是PIPES的钠盐很容易溶解。如果使用的是游离酸形式的缓冲液,请使用氢氧化钠将其转化为钠盐,以提高在较低pH下的溶解度。像HEPES一样,PIPES不适用于涉及氧化还原反应的实验,因为它会导致自由基的形成。

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