上样缓冲液即loading buffer,是蛋白质、核酸DNA与RNA的研究实验中溶解和添加样品时所用的一类上样缓冲液,蛋白质、DNA、RNA是不同的样品,其上样缓冲液也有所区别。
蛋白上样缓冲液的组成
其缓冲液主要采用Tris-HCl(三羟甲基氨基甲烷***)或Tris甘氨酸、与EDTA盐(乙二胺四乙酸二钠),还需添加SDS,DTT(二流苏糖醇),溴酚蓝,甘油等。
蛋白、DNA、RNA的上样缓冲液区别
SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷,这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖,消除了各种蛋白质本身电荷的差异;SDS还可以断开分子内和分子间的氢键,破坏蛋白质分子的二级和三级结构。DTT可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键,破坏蛋白质结构,消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白(亚单位),电泳速度只是与其分子量大小有关。溴酚蓝用作电泳时的指示剂,可大概指示电泳结束的时间。
核酸上样缓冲液的组成
核酸包括DNA与RNA,其上样缓冲液主要含有Tris-HCl,以及染料二***青FF、溴酚蓝(指示剂)等。指示剂溴酚蓝和二******FF起到指示的作用是显示电泳的进程,以便我们适时终止电泳。DNA与RNA的上样缓冲液基本可以通用,它们的碱基基本一致,缓冲液中的染料都可与其碱基结合,跑出条带。不过,如果使用DNA上样缓冲液,里面会夹杂一些RNA酶,这些酶有可能会影响到实验结果,使用前需要将RNA酶处理掉。
需注意的是,虽然DNA与RNA的上样缓冲液有时可以通用,但是它们与蛋白缓冲液是不能通用的。德晟是诊断试剂原料厂家,可提供蛋白与核酸研究相关的Tris、MOPS、CAPS等多种缓冲剂。